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使用液氮罐超低溫保存的方法

發(fā)布時(shí)間:2023-09-04,瀏覽量:531


  微生物可以低溫保存,低溫保存法有廣泛的微生物保存法。對(duì)于需要雜亂養(yǎng)分的微生物種,如果不能堅(jiān)持其生命力(如植物病原性真菌)的其他儲(chǔ)存方法,一般可以低溫保存。

  這種方法是以較慢的冷凍速度(1℃/分鐘)冷凍存在于小管或安瓿中的細(xì)胞,直到-150℃,然后將這些小管保存在-150℃?!?在196℃的液氮中。低溫冷凍保護(hù)劑不同于冷凍干燥法中使用的冷凍劑。甘油(10%)是ATCC常見的一種、大多數(shù)細(xì)胞株由二甲亞(5%)和培養(yǎng)液制成的混合物保存。

  這些化學(xué)物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞可以防止內(nèi)膜的冷凍損傷。在低溫容器中保存細(xì)胞恢復(fù)時(shí),需要小心操作。當(dāng)管道被加熱時(shí),形成的霜會(huì)殺死細(xì)胞,正確操作可以防止這種麻煩。只有快速凍結(jié)樣品,才能減少活力的喪失。方法是將密封的管道迅速放入37℃的水中,直到所有的冰都溶解,然后打開管口,將內(nèi)容物移入培養(yǎng)液。低溫保存的微生物需要保存在非常低溫的環(huán)境中,所以需要液氮罐。在長(zhǎng)期儲(chǔ)存過程中,需要經(jīng)常注意液氮的填充。

  與凍干法相比,這種儲(chǔ)存方法需要更多的資金,包括勞動(dòng)力和液氮等,以保持儲(chǔ)存溫度。金鳳液氮罐

  1數(shù)據(jù)病毒低溫保管所需數(shù)據(jù)包括:熱收縮塑料管、液氮罐、防護(hù)手套及面罩、標(biāo)記筆、氣體噴燈、液氮保溫瓶。

  2方法

  (1)剪一段兩端各超過冷凍管長(zhǎng)度2cm的熱縮塑料管。金鳳液氮罐

  (2)將含有清除病毒懸液(安排培養(yǎng)的上清培養(yǎng)液,或安排培養(yǎng)液中的細(xì)胞溶解物)的上清懸液冷卻幾分鐘,用殺菌移液管將0.2ml冷卻后的上清懸液分配到冷凍管中,并擰緊蓋子。

  將病毒冷凍管放入熱收縮塑料管中,刺入正確的標(biāo)簽。

  (4)用噴燈小心加熱收縮塑料管,并將其包裹在冷凍管中。切記不要在過高的溫度下加熱收縮塑料管。

  再次小心加熱收縮塑料管的兩端,用大鑷子將管端口夾緊至完全密封。

  (6)在配有液氮的保溫瓶中快速冷凍密封的冷凍管(操作時(shí)需戴口罩和手套)。

  (7)將冷凍冷凍管放入液氮罐內(nèi)的格子中,一起記錄樣品的具體存放方向、實(shí)驗(yàn)編號(hào)、存放日期等。

  (8)需求耗時(shí),從液氮罐中快速取出所需樣品,放入37℃水浴箱冷凍后,用解剖刀將熱收縮塑料管用冷凍管的硅化墊圈切開。擰開冷凍管的蓋子時(shí),不需要去除熱收縮塑料管。


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